martes, 10 de mayo de 2011

Purificación de ADN y ARN


Purificación de ARN : (TRI-REAGENTtm). Consiste en una mezcla de tiocianato de guanidinio y fenol. El guanidinio es un agente desnaturalizante muy fuerte. Lo que se va a conseguir es que se produzca la lisis de la célula y a su vez la inactivación de las ribonucleasas, por lo que va a ser un compuesto idóneo para la purificación de ARN. El protocolo es el siguiente:
  1. Se homogeneiza la muestra de células en 500 μl de TRI-REAGENT. Se añaden 500 μl más de TRI-REAGENT y se vuelve a mezclar todo con ayuda de la micropipeta. Se incuba 5 min a temperatura ambiente.
  2. Se adicionan 200 micro litros de cloroformo frío. A continuación se cierra correctamente el tubo y se agita con su contenido. Después, se incuba 5 minutos a temperatura ambiente.
En cuanto a la purificación de ADN, existen diferentes tipos de métodos para purificar el ADN, pero todos ellos tienen los mismos pasos en común.

Primero se va a proceder al cultivo de las células, después a la lisis de la célula para la liberación de ADN y luego a la purificación del mismo. La lisis se produce gracias a la actuación del NaOH Añadir imagenen presencia de un detergente fuertemente aniónico, que va a ser normalmente el dodecil sulfato.

Además de la lisis celular, se produce la desnaturalización del ADN ribosómico y de las proteínas, y la liberación de los plásmidos.
 
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