viernes, 6 de mayo de 2011

Lisis celular ADN


Los ácidos nucleicos se encuentran dentro de la célula y para separarlos de ésta es necesario recurrir a procedimientos de lisis celular, que pueden ser mecánicos, químicos o enzimáticos. Los procedimientos de lisis son diferentes según el tipo de célula de la cual queramos obtener los ácidos nucleicos y el método de obtención que queramos usar. A continuación veremos que los métodos mecánicos de lisis más comunes son:

  • Moler con mortero en nitrógeno líquido: para lisar células de tejidos animales duros (hueso) y blandos (bazo), tejidos vegetales y hongos. Este método además mantiene la muestra a bajas temperaturas, por lo que se evita que las nucleasas endógenas degraden el material de interés.
  • Homogeneizar en Dounce o Polytron: se trata de un instrumento generalmente de vidrio que consta de dos piezas, un tubo de vidrio donde se introduce la muestra y una varilla que puede acabar en cuchillas (pistón). Ésta se introduce en el tubo y se hace girar a la vez que se mete y se saca, sirve para lisar células de tejidos animales duros o blandos, tejidos vegetales, hongos y bacterias.
  • Molino criogénico: se introduce la muestra en un molino y se baña con nitrógeno líquido, al pulverizar se obtiene un polvo muy fino. Se usa para lisar células de tejidos muy duros. Este método además mantiene la muestra a bajas temperaturas, con lo cual se evita la acción de nucleasas endógenas que pudieran degradar el material de interés.
  • Molino de perlas: se usa para lisar células de tejidos semiduros o duros y células de la levadura.

 
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